Beschreibung Testaufbau
Der Kern jedes Lateral Flow Immunoassay sind poröse Nitrocellulosemembranen, auf denen zumeist linienförmig, Antikörper aufgebracht sind. Diese Membranen ermöglichen die Migration der Probe durch die porösen Strukturen, wobei der Analyt aus der Probe spezifisch an den fixierten Antikörpern auf der Membran angereichert wird.
Neben der Nitrocellulosemembran sind weitere verschieden funktionale, nacheinander überlappende Membranen auf einer selbstklebenden Plastikkarte fixiert. Bevor die Probe durch die Nitrocellulosemembran migriert, wird Sie auf ein Samplepad aufgebracht, welches für eine gleichmäßige Verteilung und eine Vorbehandlung der Probe sorgt. Vom Samplepad wird die Probe in das anliegende Konjugatpad transportiert, in welches farbpartikelmarkierte Antikörper eingebracht sind. Diese Farbpartikelkonjugate binden spezifisch an den Analyten in der Probe und sind für die Visualisierung an der Testlinie erforderlich. Von dort wird der Probe-Farbpartikel-Konjugat-Komplex in die Nitrocellulosemembran geführt, auf der durch die Analytanreicherung und damit der Anreicherung der farbigen Nanopartikel eine farbige Bande erzeugt wird. Überschüssige Farbstoffpartikelkonjugate werden an einer zweiten Linie auf der Nitrocellulosemembran gebunden und bilden eine zweite von der Reaktion unabhängige Kontrolle, die die Funktionalität des Tests anzeigt. Abschließend wird die Probe an das hinter der Kontrollzone gelagerte Wickingpad weitergeleitet und dort aufgenommen, um einen Rückfluss zu verhindern.
Merkmale
Der Lateral Flow Assay besitzt eine ganze Reihe von Alleinstellungsmerkmalen, die ihn zu einem besonderen POCT machen. Die Basis eine Nachweismethode herzustellen, die auf Papierstreifen basiert, macht ihn zu dem kostengünstigsten Immuoassay weltweit. Der Einsatz von Antikörpern ist verantwortlich für einen sensitiven und spezifischen Nachweis. Die Grundlage, die Migration von Flüssigkeiten durch poröse Strukturen, machen alle Automatisierungsschritte und Geräte überflüssig. Hinzu kommt die Möglichkeit einer skalierbaren Produktion und der wohl größte Vorteil, die Robustheit. Nur wenige Immunoassays zeigen die gleiche Wiederstandkraft gegenüber verschiedenen Umgebungsbedingungen auf, wie der Lateral Flow Assay.
Einige der oft beschriebenen Limitationen der LFAs gehören der Vergangenheit an. Kostengünstige und qualitativ hochwertige Analysegeräte erobern den Markt und erlauben quantitative Analyseergebnisse, wo bisher nur ja/nein Aussagen möglich waren. Neuartige Technologien ermöglichen außerdem die Etablierung von Multiplexanalysen.
Ausblick
Die Translation verschiedener Forschungsergebnisse auf andere POCT Ansätze, wie die Lab-on-a-Chip Technologie, gestaltet sich aus verschiedensten Gründen schwierig. Die gut etablierte LFA Technologie ist dagegen sehr gut für zukünftige Herausforderungen und Anwendungen gerüstet.